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如何正確進(jìn)行ELISA試劑盒的洗滌步驟?
ELISA試劑盒洗滌步驟操作指南?
一、洗滌次數(shù)與方式?
常規(guī)洗滌次數(shù)?
每次孵育(如抗原/抗體結(jié)合、酶標(biāo)物反應(yīng))后需洗滌 ?3-5次?,以去除未結(jié)合物質(zhì)并降低背景干擾?。
若背景值高,可增加至5次洗滌;若信號(hào)弱,減少至3次?。
洗滌方法?
手工洗板?:
每孔加入洗滌液(如PBST)至滿孔,靜置1-2分鐘,吸干后拍干?。
避免用力過(guò)猛,防止抗原抗體復(fù)合物脫落?。
洗板機(jī)洗板?:
確保酶標(biāo)板平整,避免洗液殘留?。
二、關(guān)鍵操作細(xì)節(jié)?
洗滌液配置?
使用新鮮配制的洗滌液(如1×PBST),避免放置過(guò)久產(chǎn)生絮狀物?。
若洗滌液結(jié)晶,需37℃加熱溶解后稀釋?。
溫度與時(shí)間控制?
洗滌液溫度建議保持在20-30℃,避免低溫導(dǎo)致“花板"現(xiàn)象?。
每次浸泡時(shí)間需≥1分鐘,確保充分洗滌?。
拍干技巧?
使用一次性吸水紙垂直拍干,避免交叉污染?。
酶標(biāo)板拍干后需立即進(jìn)行下一步操作,防止干燥導(dǎo)致信號(hào)減弱?。
三、常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案?
“花板"現(xiàn)象?:
可能原因:洗滌不凈、板不平整或孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)?。
解決:增加洗滌次數(shù)、檢查板平整度、控制孵育時(shí)間?。
高背景值?:
可能原因:洗滌液失效或拍干不凈?。
解決:更換新鮮洗滌液、需要拍干?。
注:以上資料僅供參考,不作為實(shí)驗(yàn)依據(jù),具體產(chǎn)品說(shuō)明請(qǐng)咨詢品牌供應(yīng)商或技術(shù)老師。
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